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    小鼠細胞周期相關(guān)因子p16(p16)酶聯(lián)免疫分析 試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
    2023/9/24 [616]
    小鼠細胞周期相關(guān)因子p16(p16)酶聯(lián)免疫分析
    試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
    本試劑盒僅供研究使用。
    檢測范圍:
    96T
    1ng/L -50 ng/L
    使用目的:
    本試劑盒用于測定小鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中細胞周期相關(guān)因子 p16(p16)含量。
    實(shí)驗原理
    本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠細胞周期相關(guān)因子 p16(p16)水平。用純化的小鼠細胞周期相關(guān)因子 p16(p16)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入細胞周期相關(guān)因子 p16(p16),再與 HRP 標記的細胞周期相關(guān)因子 p16(p16)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過(guò)徹-底洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB HRP 酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的細胞周期相關(guān)因子 p16(p16)呈正相關(guān)。用酶標儀在 450nm 波長(cháng)下測定吸光度(OD 值),通過(guò)標準曲線(xiàn)計算樣品中小鼠細胞周期相關(guān)因子 p16(p16)濃度。
    試劑盒組成
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    標本要求
    1.標本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻進(jìn)行,提取后應盡快進(jìn)行實(shí)驗。若不能馬上進(jìn)行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
    2.不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。
    操作步驟
    image.png
    2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品 10μl(樣品最終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
    3. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
    4. 配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
    5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此重復 5 次,拍干。
    6. 加酶:每孔加入酶標試劑 50μl,空白孔除外。
    7. 溫育:操作同 3。
    8. 洗滌:操作同 5。
    9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10 分鐘.
    10. 終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(此時(shí)藍色立轉黃色)。
    11. 測定:以空白孔調零,450nm 波長(cháng)依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止液后 15 分鐘以?xún)冗M(jìn)行。

    操作程序總結:

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    計算
    以標準物的濃度為橫坐標,OD 值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線(xiàn),根據樣品的OD 值由標準曲線(xiàn)查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與 OD 值計算出標準曲線(xiàn)的直線(xiàn)回歸方程式,將樣品的 OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實(shí)際濃度。
    注意事項
    1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 1 小時(shí)后方可使用,酶標包被板開(kāi)封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
    2.濃洗滌液可能會(huì )有結晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結果。
    3.各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時(shí)間最好控制在 5 分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。
    4. 請每次測定的同時(shí)做標準曲線(xiàn),最好做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過(guò)高(樣本 OD 大于標準品孔第一孔的 OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n 倍)后再測定,計算時(shí)請最后乘以總稀釋倍數(×n×5)。
    5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
    6.底物請避光保存。
    7.嚴格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
    8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
    9.本試劑不同批號組分不得混用。
    保存條件及有效期
    1.試劑盒保存:;2-8℃。
    2.有效期:6 個(gè)月
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    津公網(wǎng)安備 12010302002413號

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